FBN1基因分析在马凡综合征产前诊断中的应用
目的对4例马凡综合征（Marfansyndrome，MFS）患者的原纤维蛋白-1（fibrillin-1，FBN1）基因进行突变检测及产前诊断，为患者提供准确的病因诊断和遗传咨询。方法对4例临床典型MFS患者进行FBN1基因筛查，确定突变类型后，于孕18～20周经羊膜腔穿刺抽取羊水，并抽提DNA，PCR扩增FNB1基因，PCR产物进行双向测序。结果例1FBN1基因第46内含子的+1位碱基发生置换IVS46+1GA，为已报道突变；例2第35外显子的位碱基发生错义突变c.TG（CysGly）；例3第21外显子位碱基发生错义突变c.GA（CysTyr）；例4第28外显子位碱基A缺失c.delA。c.TG（CysGly）、c.GA（CysTyr）和c.delA为新发突变。4例胎儿羊水的也分别检测到IVS46+1GA、c.TG（CysGly）、c.GA（CysTyr）和c.delA突变。结论FBN1基因筛查可以检测出患者及其家系中胎儿的突变位点和类型，具有明确的诊断价值，有助于遗传咨询。
马凡综合征；DHPLC；原纤维蛋白-1；基因突变；产前诊断
FBN1geneanalysisforprenataldiagnosisoffourpatientswithMarfanSyndrome
ObjectiveTodetectthemutationinthefibrillin-1(FBN1)genebyscreeningthegenefrom4patientswithMarfanSyndromeforprenataldiagnosisandprovidethepreciseetiologydiagnosisandgeneticcounselingforthem.MethodsPCRwasusedtoconfirmtheFBN1genemutationintheprobandsandthenamplifytheFBN1genebyusingthegenomicDNAfromamnioticfluidconfirmedbyDHPLCMSIanalysisfrommotherreferencein18to20weekspregnantwomen.TheproductswerefurtheranalyzedbydirectsequencingandthesequencewasblastedintheNCBIdatabase.ResultsAsubstitutionwasobservedinPatientAat+1baseintheintron46ofFBN1gene(IVS46+1GA),whichwasawell-knownmutation.Wealsoidentifiedtwonovelmissensemutationsat+baseintheintron35(c.TG,CysGly)inPatientBandat+baseintheintron21(c.GA,CysTyr)inPatientC.Inaddition,wefoundanoveldeletionat+inintron28(c.delA)inPatientD.Theseresultsfromtheprobandsareconsistentwiththeirfetuses.ConclusionFBN1geneanalysisisawaytoknowtheexactmutationsitesandtypesintheprobandsandtheirfetuses,whichmayassistnotonlyintheinterpretationofgeneticinformationforprenataldiagnosisandgeneticcounseling.
Marfansyndrome;DHPLC;fibrillin-1;genemutation;prenataldisgnosis
马凡综合征（Marfansyndrome，MFS）是一种常染色体不完全外显性遗传病，临床表现多样，主要涉及心血管、骨骼和眼等系统，其中以心脏及血管的并发症最为严重，至少90%的MFS患者有心脏受累。年，Dietz[1]发现原纤维蛋白-1基因（FBN1）是MFS的致病基因。年，Ghent疾病分类学把FBN1突变归为MFS诊断的主要指标[2]。FBN1基因定位于15q21.1，全长kb，含65个外显子，目前该基因已确定的突变至少有种，尚无突变热点[3]。
已有研究报道，对MFS妊娠患者进行产前诊断已经在一些告知性的家庭中展开[4,5]。对MFS的研究结果表明，FBN1突变位置与表型存在一定关联[6]，如临床表型较重的MFS突变多发生在基因中间区域的cb-EGF钙结合区。因此，对MFS重症患者进行FBN1基因突变分析及产前诊断，以避免重症患儿的出生。
本研究中我们对4例重症MFS患者进行FBN1基因突变检测及产前诊断，以明确其后代发病风险为患者提供遗传咨询。
1对象与方法
1.1对象
4例马凡综合征患者的诊断符合年DePaepe[2]全面修正的马凡综合征诊断标准。
例1男，30岁，无家族史，高度近视，双侧晶状体半脱位；无脊柱侧弯，扁平胸，高腭弓，指征及腕征阳性，反复自发性气胸；28岁时因主动脉根部扩张（直径.5px）和主动脉瓣重度反流而在全麻体外循环下行Bentall术。
例2女，26岁，家族史阳性，其母57岁时因主动脉夹层破裂去世；高度近视，无晶状体脱位；无明显脊柱侧弯和胸廓畸形，指征、腕征阳性；主动脉窦部扩张(直径.99px)。
例3男，27岁，无家族史，高度近视，左侧晶状体半脱位，右侧全脱位；脊柱明显侧弯，鸡胸和扁平胸，高腭弓，指征及腕征阳性；26岁时因主动脉根部扩张（直径px）和主动脉瓣及二尖瓣重度反流而在全麻体外循环下行Bentall加二尖瓣置换术。
例4男，32岁，无家族史和眼睛系统症状；脊柱无明显侧弯，鸡胸和扁平胸，高腭弓，指征及腕征阳性；28岁时因主动脉窦部扩张（直径.5px）和重度反流而在全麻体外循环下行Bentall术。
1.2方法
1.2.1基因组DNA抽提
经知情同意后，取患者及家系成员静脉血2mL，EDTA抗凝。用全血基因组DNA抽提试剂盒(QIAGEN公司)按操作说明书提取基因组DNA。签署知情同意书后，于孕18～20周经羊膜腔穿刺抽取羊水，r/min离心20min，弃上清，然后根据全血基因组DNA抽提试剂盒(QIAGEN公司)进行提取。医院医院道德委员会批准。
1.2.2PCR反应
根据NCBI已报道FBN1序列设计65对引物（包含全部的外显子和剪接位点），引物由上海生工合成。所有引物均用梯度PCR进行扩增，其中第3、26、40、45、63外显子的退火温度为68.0°C，每个循环降0.5℃，共10个循环，63℃扩增14个循环，然后用65℃扩增30个循环；其余引物的退火温度则是59℃，每个循环降0.5℃，共10个循环，54℃扩增14个循环，然后用57℃扩增30个循环；取5μLPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。
1.2.3DNA测序
对电泳条带准确且明亮的PCR产物样本进行DNA测序，测序结果与NCBI数据库中FBN1的序列（序列号：NM_）进行比对，确定突变位点，然后和FBN1突变数据库（白巅峰专科医院那里好北京最好白癜风医院
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